高效液相色谱仪的原理是什么（高效液相色谱仪检测项目）

高效液相色谱仪的原理是什么？HPLC是应用高效液相色谱原理，主要用于分析沸点高、不挥发、受热不稳定、分子量大的有机化合物的仪器设备。它由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等组成。储液器中的流动相由高压泵泵入系统，样品溶液通过进样器进入流动相，由流动相加载到色谱柱(固定相)中。由于样品溶液中各组分在两相中的分配系数不同，在两相中相对运动过程中，经过反复的吸附-解吸分配过程，各组分的运动速度差别较大，分离成单一组分，依次流出柱外。当通过检测器时，样品浓度被转换成用于传输的电信号。高效液相色谱广泛应用于生命科学、食品科学、药物研究和环境研究。

储液器中的流动相由高压泵打入检测系统，样品溶液通过进样器进入流动相，由流动相加载到色谱柱(固定相)中。由于样品溶液中各组分在两相中的分配系数不同，经过反复的“吸附-解吸”分配过程，各组分的移动速度差异很大，被分离成单一组分，依次流出色谱柱，通过检测器时，

根据分离机理的不同，HPLC原理可分为液-固吸附色谱法、液-液分配色谱法(正相和反相)、离子交换色谱法和分子排阻色谱法。

1.液-固吸附色谱法

在液固吸附色谱中，固定相是固体吸附剂，根据各组分吸附能力的不同，可以实现组分的分离。常用的吸附剂是硅胶或氧化铝，多用于非离子化合物。吸附色谱的固定相可以分为极性和非极性两类。对流动相的要求是：

1)所选溶剂应与固定相不混溶，并保持色谱柱的稳定性。

2)选择的溶剂应具有高纯度，以防止微量杂质在色谱柱中积累，导致色谱柱性能发生变化。

3)所选溶剂的性能应与所用的检测器相匹配。如果使用紫外吸收检测器，不能选择在检测波长有紫外吸收的溶剂；如果使用折光率检测器，则不能使用梯度洗脱。

4)选择的溶剂应对样品有足够的溶解能力，以提高测定的灵敏度。

5)选择的溶剂应具有低粘度和适当低的沸点。

6)尽量避免使用有明显毒性的溶剂，以确保工人的安全。

液固色谱是基于表面吸附能力，所以常用于分离不同极性的化合物，也可以分离极性基团相同但数量不同的样品。

2.液-液分配色谱法

固定相是液体，分离的组分根据它们在流动相和固定相中的溶解度进行分离。根据固定相和流动相的极性不同，可分为正相色谱和反相色谱。正相色谱以极性固定相和流动相作为相对非极性的疏水溶剂，常用于分离中等极性和强极性的化合物。反相色谱一般使用非极性固定相，流动相为水或缓冲溶液，适用于非极性和弱极性化合物的分离。其中，反相色谱法应用最为广泛。

3.离子交换色谱法

固定相是离子交换树脂。树脂上的可电离离子与流动相中带相同电荷的离子和被测组分的离子进行交换，根据每个离子与离子交换基团之间不同的电荷吸引而被分离。

4.凝胶过滤色谱

分子排阻色谱法又称凝胶色谱法，是根据分子大小的顺序进行分离的色谱方法。分子排阻色谱固定相凝胶是一种具有一定形状和稳定性的多孔高分子材料。分离是利用分子筛对不同分子量组分排斥能力的差异来完成的。根据所用流动相的不同，凝胶色谱可分为两类：以水溶剂为流动相的凝胶过滤色谱(GFC)和以四氢呋喃等有机溶剂为流动相的凝胶渗透色谱(GPC)。

高效液相色谱仪的检测项目主要针对具有紫外吸收的液态有机物(不饱和有机物)的定性定量分析和纯度分析。

定性：A为保留时间的特征峰。没有办法分析物质结构，但是如果知道物质是X，可以和X标准物质进行比较。色谱图显示保留时间一致，确定该物质为x .多用于鉴别试验中的色谱鉴别。

定量：浓度与峰面积成正比。知道了物质的成分，就可以从标准物质的标准曲线计算出待测物质的纯度。多用于含量测定。

纯度分析：这是基于波长。在特定波长下进样，根据主成分色谱峰和杂质色谱峰的峰面积，粗略判断物质的纯度。主要用于相关物质的测定。

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