分光光度计工作基本原理_分光光度计工作原理及特点

分光光度计又称光谱仪，是将成分复杂的光分解成谱线的科学仪器。测量范围一般包括波长范围为380~780 nm的可见光区和波长范围为200~380 nm的紫外光区。不同的光源有各自的发射光谱，因此可以使用不同的发光体作为仪器的光源。钨灯发射光谱：钨灯光源发出的波长为380 ~ 780 nm的光谱光经棱镜折射后，可得到由红、橙、黄、绿、蓝、靛、紫组成的连续色谱图；这种色谱可用作可见光分光光度计的光源。

分光光度计的简单原理分光光度计是利用一个可以产生多个波长的光源，通过一系列的光谱仪，产生一个特定波长的光源。光源通过被测样品后，部分光源被吸收，计算出样品的吸收值，换算成样品的浓度。样品的吸光度与样品的浓度成正比。

分光光度计的基本工作原理分光光度计的基本工作原理是基于物质吸收光的选择性(光的波长)，不同的物质有各自的吸收带，所以当光色散后的光谱通过某一溶液时，部分波长的光会被溶液吸收。在一定波长下，溶液中物质的浓度与光能衰减程度存在一定的比例关系，即符合比尔定律。

T=I/Io lg(Io/I)=cb

其中t为透射率，Io为入射光强度，I为透射光强度，A为消光值(吸光度)，为吸收系数，B为溶液光程长度，C为溶液浓度。从上式可以看出，当入射光、吸收系数和溶液厚度一定时，透光率随溶液浓度的变化而变化。

分光光度计已经成为现代分子生物学实验室的常规仪器。它通常用于核酸、蛋白质和细菌生长浓度的定量。

分光光度计具有独特的双光束光学系统，分辨率更高，杂散光更低，稳定性和可靠性更强，分析更准确。

采用320*240位点阵高亮6”液晶，显示清晰，信息完整；

独特的长光路设计使仪器的分辨率更高，尤其适用于微量测试强大的数据处理功能，使测试结果得到充分应用，用户编辑起来更加简单快捷；

设计了悬浮式光学系统，整个光路独立固定在16mm厚的铝基板上，不变形。底板变形和外界振动对光学系统没有影响，大大提高了仪器的稳定性和可靠性。

采用同步正弦机构，波长精度高，重复性好；

采用ARM系统；

可自动选择0.1/0.2/0.5/1.0/2.0/4.0的光谱带宽，满足不同用户的测量需求；

24位高速高精度A/D转换，仪器精度更高，响应速度更快；

主要元器件采用进口，使仪器杂散光更少，更稳定可靠；

功能更加强大，主机可以独立完成光度测量、定量测量、光谱扫描、动力学、DNA/蛋白质测试、多波长测试、数据打印。

考虑到不同用户的使用习惯，该系列仪器标配颜渊公司的光谱扫描软件。在线运行时，不仅可以实现主机的所有测试功能，还可以实现更强大的数据处理功能，使数据存储量无限。

波长的选择波长的选择一般是选择待测物质最大吸收峰的波长(max)。因为吸光度是在max处测量的，所以灵敏度最高。在吸收峰波长处测量吸光度时，波长变化的影响最小；在其他波长下，波长变化对吸光度的影响很大，甚至测得的浓度-吸光度曲线也不平直。

选择测量溶液所需的波长，就是可以用不同的波长作为溶液的吸收光谱曲线，从曲线中选择最合适的波长来测量溶液。但是在分析工作中，还是有一些情况，不能仅仅依据这个原理。而是要按照以下三个原则进行实际测试，然后充分考虑利弊再进行选择。

1.被测溶液应具有适当的光密度。一般来说，合适的光密度是0.1-0.7，0.2-0.6最理想。由于仪器的读数误差，过低的光密度会导致较大的相对误差，而过高的光密度通常会超出直线范围并引入误差。

2.干扰效应应该被最小化。在反应中，如果干扰色不易去除，应选择对该干扰色最不敏感的波长。

3.标准曲线应尽可能接近直线。

721型分光光度计的结构721型分光光度计允许的波长范围为360 ~ 800 nm，结构相对简单，灵敏度和精度较高。因此被广泛使用。

从光源灯发出的连续辐射光线入射到聚光透镜上，会聚，然后通过90平面镜角反射到入射狭缝。因此，入射光进入单色仪，狭缝正好位于球面准直物镜的焦平面上。当入射光被准直物镜反射时，它作为平行光发射到棱镜。光线进入棱镜后，就被分散了。散射后回来的光会被准直器反射，然后聚集在发光狭缝上，通过聚光镜后进入比色皿。一部分光会被吸收，透射光进入光电池产生相应的光电流，经放大后在微安表上读出。

如何使用721型分光光度计首先打开电源，打开电源开关1，指示灯亮，打开比色皿的黑盒盖8，预热20分钟。

波长选择旋钮6用于选择所需的单色光波长，灵敏度旋钮2用于选择所需的感光档位。

(3)放入比色皿，将调零旋钮5旋至零位，关闭比色皿黑匣子盖，推动比色皿拉杆3，使参比比色皿处于空白校正位置，使光电管见光，转动透光率调节旋钮4，使微安计9的指针准确指向100%。按照上述方法，可以连续几次调整零位和100%位置，然后进行测定。

721型分光光度计使用维护注意事项：仪器连续使用时间不要超过2小时，最好间隔0.5小时后使用。

每次使用后，应使用去离子水清洗比色皿，倒置并干燥，存放在比色皿盒中。在日常使用中，要注意保护比色皿的透光面不受损伤或刮伤，以免影响透光率。

(3)仪器不能受潮。日常使用中要时刻注意单色仪上(仪器底部)的防潮硅胶是否变色。如果硅胶颜色已经变红，应立即取出晾干或更换。

托运或移动仪器时，应小心轻放。

标签：仪器波长光度

波长